信使核糖核酸(messenger RNA,縮寫:mRNA),是由DNA經由轉錄而來,帶著相應的遺傳訊息,為下一步翻譯成蛋白質提供所需的訊息。在細胞中,mRNA從合成到被降解,經過了數個步驟。在轉錄的過程中,第二型RNA聚合酶(RNA polymerase II)從DNA中復制出一段遺傳訊息到前mRNA(尚未經過修飾或是部分經過修飾的mRNA,英文pre-messenger RNA,簡稱pre-mRNA,或是heterogeneous nuclear RNA,簡稱hnRNA)上。在原核生物中,除了5'加帽之外mRNA并未被進一步處理(但有些罕有的特例),而經常是邊轉錄邊翻譯。在真核生物中,轉錄跟翻譯發生在細胞的不同位置,轉錄發生在儲存DNA的細胞核中,而翻譯是發生在細胞質中。
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本文通過以下幾點闡述麥克林mRNA試劑的原理及相關參數:
1、 轉錄后修飾
2、非編碼區/未翻譯區
3、mRNA密碼子與氨基酸的對應
4、反義RNA(anti-sense RNA)
5、麥克林mRNA及翻譯后修飾試劑相關產品介紹
轉錄后修飾
在真核生物中,mRNA在準備好翻譯前需要經過多個處理步驟:
1、首先pre-mRNA需要加上一個5'端帽(capping)--經過甲基化(methylation)修飾的鳥嘌呤被加到mRNA的3'端。這個5'端帽對于mRNA運輸到細胞質并與之后接到適當的核糖體,以及mRNA本身的穩定是相當重要的。mRNA如果缺乏5'端帽,則很容易就被降解掉。而mRNA由5'到3'的降解亦是由移除5'端帽開始。
2、mRNA剪接(mRNA splicing)--mRNA前體去除掉內含子而保留外顯子的修飾過程。通常mRNA前體能經由數種不同的剪接方式,產生不同組態/型式的mRNA,使一段基因在不同的組織或發育過程中能經過轉錄-剪接-翻譯后產生不同型式的蛋白質,進而擁有不同的作用,或是產生出穩定性差的mRNA達到調控基因表達的目的。這種剪接型態叫做選擇性剪接。絕大部分mRNA的剪接都是由剪接體所執行,只有少數例外,例如histone mRNA沒有內含子,但是其pre-mRNA卻需要經由另外的剪接方式才能產生成熟mRNA。以上所述為分子內剪接(cis-splicing),而mRNA剪接作用亦可發生在不同mRNA分子之間(trans-splicing),后者常見于原生生物的mRNA剪接。除了mRNA之外,有些RNA分子也有能力催化自身的修剪,例如核酸酶會做自我切除,而第I或第II型外顯子在特殊環境下可以不借由蛋白質酵素的作用而進行剪接,稱為自剪接作用。
3、多聚腺苷酸化(polyadenylation)--借由酵素多聚腺苷酸聚合酶(poly(A) + polymerase),在mRNA前體的3'端上加上了一段數個腺嘌呤序列(通常是數百個),(這項修飾并不會出現在原核生物中)。這段多聚腺苷酸尾鏈在轉錄的時候,會因為mRNA上一段特殊的訊息,AAUAAA,而在mRNA后方特定位置上加上多聚腺苷酸尾鏈。多聚腺苷酸尾鏈會被多聚腺苷酸結合蛋白(poly(A) + tail-binding protein, PABP)辨識并保護住。這段AAUAAA訊號的重要性可以從以下這個例子看出:當要轉錄時,DNA分子上的AATAAA片段如果產生突變,將會導致某些血紅素缺陷。另外,對于部分histone mRNA而言,此過程是不被需要的。改變tRNA對mRNA上密碼子的識別,更可能改變了蛋白質上氨基酸的組成。
多聚腺苷酸化(polyadenylation)能增加轉錄的半生期,使得mRNA在細胞中的存在時間能延長得久一些,因此能再翻譯出更多的蛋白質。
在pre-mRNA在被修飾過之后(包含RNA剪接及加上5'端帽與3'端上多聚腺苷酸尾),形成成熟的mRNA,從而可準備進行翻譯。成熟mRNA從細胞核被送出到細胞質中,然后核糖體結合在其上,開始翻譯出蛋白質。隨著時間進行,mRNA的多聚腺苷酸尾會被專門的外切核酸酶縮短,而5'端帽也可能被除去,使得該聚合物易受到核酸外切酵素的影響而被降解。
非編碼區/未翻譯區
在RNA起始密碼子之前,與終止密碼子(stop codon)之后,各有一段非編碼區,各被稱作5'UTR與3'UTR,(5'與3'非編碼區,因為DNA與RNA分子都是由5'端到3'端,也就是說這些區域是在RNA分子的兩端)是屬于不翻譯出蛋白質的序列。然而,這些區域的重要性在于它們的序列有可能借由這些區域與不同的RNA結合蛋白(RNA-binding protein)結合,進而改變在細胞中的位置、決定mRNA的穩定性/半生期,以及對細胞受到刺激時的反應而生的翻譯調控。這些都是與細胞調控本身的活性有關。
在UTRs上的某些蛋白質復合物不僅能影響RNA的穩定度,也能促進翻譯效率或是抑制翻譯,這多是依據位在UTRs上的序列而定。有些在UTR上的基因遺傳的變異也會造成上述的RNA穩定度或是翻譯效率的改變。
成熟真核細胞的mRNA的結構。一個完整的mRNA包括有5'端帽、5'非翻譯區、編碼區、3'非翻譯區和poly(A)尾鏈
mRNA密碼子與氨基酸的反應
反義RNA(anti-sense RNA)
在許多真核生物中,當反義RNA上的堿基與基因的某段mRNA互補時,反義RNA可以抑制翻譯。反義RNA存在于細胞中之時,其互補的基因就不會合成蛋白質。這也許是一種對抗逆轉錄轉座子或病毒復制的一種機制(retrotransposons是以雙股RNA作中介狀態的轉座子),因為這兩者都能使用雙鏈RNA當中介物。在生物化學的研究中,借由使用一段反義mRNA使得標靶mRNA無法作用(RNA干擾),這種方法已經被廣泛用于研究基因的功能;例如利用RNA干擾技術。
麥克林mRNA及翻譯后修飾產品介紹
麥克林mRNA及翻譯后修飾試劑產品優勢:
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貨號 | 產品名稱 | CAS號 |
E868324 | 2-[(2-氰基乙氧基)(4,4-二苯基環己氧基)膦酰氧基]乙酸乙酯, ≥98% | 2173111-94-7 |
X820580 | 5-溴-4-氯-3-吲哚神經氨酸, 97% | 160369-85-7 |
N818239 | N -乙酰- D- 乳糖胺, 98% | 32181-59-2 |
L812317 | 植物血球凝集素, 50-100 ug/ml | 9008-97-3 |
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